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Separação espermática por gradiente de densidade visando a sexagem de espermatozóides em bovinos

PEIXER, M.A.S. Separação espermática por gradiente de densidade visando a sexagem de espermatozóides em bovinos. [The use of differents density gradients for the bovine sperm separation and in vitro embryo production]. Brasília, 2001. Dissertação (Mestrado) – Faculdade de Medicina, Universidade de Brasília.

Resumo
Com o objetivo de desenvolver e adaptar métodos de sexagem de espermatozóides fundamentados na densidade das células espermáticas foram desenvolvidos experimentos de separação espermática utilizando gradientes de Percoll e de BSA. Para os experimentos, foram utilizados amostras de sêmen congelados de touros da raça Nelore e Simental. Para a sexagem espermática, foram elaborados cinco diferentes grupos: Grupo NaCl (GNaCl) – uma coluna de Percoll 45% sobreposta à outra de Percoll 90%, com centrifugação a 700g, por 30 minutos; Grupo Percoll 7 Colunas (GP7C) - Gradiente de Percoll com 7 colunas, denominadas Percoll 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% e 90%; Grupo NaCl-Modificado (GNaCl-M) – Gradiente Percoll 45/90; Grupo BSA (GBSA) - Gradiente Percoll 45/90, com centrifugação a 700g, por 30 minutos. O sedimento obtido foi ressuspenso e novamente centrifugado em gradiente de BSA constituído de 3 colunas sobrepostas (12,5%; 20% e 25%), com velocidade de 100g, por 5 minutos; Grupo Controle (GC) – Neste grupo, o sêmen foi descongelado e não sofreu passagens por gradientes de densidade. O sêmen foi analisado quanto à perda de acrossoma, patologias de cabeça, peça intermediária e cauda, bem como a integridade da cromatina. Os resultados indicam que as metodologias utilizadas não afetaram a integridade da cromatina dos espermatozóides. O GP7C induziu a uma perda total ou parcial do acrossoma. A utilização do GP7C e GNaCl–M levaram a uma relação macho:fêmea diferente de 1:1 com tendência a produção de fêmeas. Os trabalhos in vivo mostraram que a separação espermática visando a sexagem não foi viável para a produção de embriões viáveis, em vacas superovuladas.


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